这是一个困扰很多液相使用者的问题。
很多人说,如果色谱柱柱头堵了,压力升高了,反冲完了效果很好!
也有很多人,包括厂商的工程师说不建议反冲,冲了会影响柱效。
各种说法众说纷纭,让这个问题几乎成了一个业界之谜。
那么,今天我们就来分析讨论一下,色谱柱到底能不能反冲,以及背后的原因是什么?
我们都知道,绝大多数液相色谱柱里面充满了直径几个微米的硅胶小球,这些硅胶小球在高压条件下被填入了色谱柱以后,色谱柱的两端需要用筛板封起来,这样既能够让流动相顺利通过,又保证硅胶小球老老实实呆在色谱柱里面,不会跟着流动相跑出来。
当然筛板的孔径要足够小,不然就封不住硅胶小球。
但是入口筛板孔径如果做得特别小,也会产生一个问题,那就是很容易被样品堵塞。样品稍微有一点没处理好,或者没有溶解好,筛板就被堵了,柱压就升高了,甚至柱子就废掉了。
所以,很多厂商就决定把色谱柱入口的筛板孔径做得比出口筛板的孔径大一些,这样既能保证硅胶小球不会被冲出色谱柱,也能让柱头不那么容易堵塞。
但是,这种情况下,色谱柱往往就不能反冲了。
因为如果反冲,在把堵塞在入口筛板上的污染物冲出来的同时,柱头的填料可能也会被冲出来,造成柱效的降低,甚至色谱柱的报废。
说到这里,我们总结一下:
如果色谱柱出入口筛板孔径一致的话,那就可以反冲,正反使用都无所谓,即使是色谱柱上面标注了方向(还需注意色谱柱的填料基质)。
但是如果色谱柱出入口筛板孔径不一致的话(一般是入口孔径大于出口孔径),反冲就有可能造成填料漏出,柱效降低等等。
那么哪些色谱柱的出入口筛板孔径是一致的,哪些是不一致的呢?色谱柱说明书上面有写吗?
不好意思,答案比较让人失望。绝大多数色谱柱的说明书上几乎都没有标明。
根据个人的了解以及跟业内人士的交流,只能给大家如下的建议:
粒径小于3.5um的小粒径的色谱柱不要反冲。因为越是小粒径柱,出入口筛板的孔径越不一致。
类似Poroshell的核壳柱不要反冲。
绝大多数5um的色谱柱都可以反冲(还需注意色谱柱的填料基质)。
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